Fluorescência de orientação cromossômica in situ hybridization (CO-FISH)

CO-FISH, ou fluorescência específica da fita in situ hybridization, facilita o direcionamento específico da fita de DNA com sondas marcadas com fluorescência. Ele explora a orientação uniforme dos principais satélites em relação à direção dos telômeros, inevitavelmente permitindo que os fios sejam inequivocamente designados como fios "Watson" ou "Crick". Usando sondas unidirecionais que distinguem as principais regiões satélites, acopladas a corantes marcados com fluorescência, filamentos individuais podem ser ligados. Para garantir que apenas a fita modelo seja rotulada, as fitas recém-formadas devem ser degradadas pela incorporação de BrdU e fotólise. Este protocolo oferece resolução citogenética melhorada, permitindo aos pesquisadores observar fitas simples em oposição a cromátides inteiras com experimentos de busca de pulso. Além disso, a segregação não aleatória de cromátides pode ser avaliada diretamente visando os principais marcadores de satélite.

Imagem 261A | RNA Fluxo de trabalho de sequenciação de célula única RNA | Yijyechern / Attribution-Share Alike 3.0 Unported | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:RNA-Seq_workflow-5.pdf) from Wikimedia Commons

Autor : Yavor Mendel

Referências:

Técnicas usuais de biologia molecular II

Ferramentas de Biologia Molecular VI