Relação com outras técnicas de amplificação

RPA é uma das várias técnicas de amplificação de ácido nucléico isotérmico a serem desenvolvidas como uma técnica de diagnóstico molecular, frequentemente com o propósito de simplificar a instrumentação laboratorial necessária em relação a PCR. Uma lista parcial de outras técnicas de amplificação isotérmica incluem LAMP, NASBA, amplificação dependente de helicase (HDA) e reação de amplificação de enzima de corte (NEAR). As técnicas diferem nas especificações do layout do primer e no mecanismo de reação e, em alguns casos (como o RPA), fazem uso de coquetéis de duas ou mais enzimas. Como o RPA, muitas dessas técnicas oferecem tempos de amplificação rápidos com potencial para instrumentação simplificada e resistência relatada a substâncias em amostras não purificadas que inibem PCR. Respeitando o tempo de amplificação, os termocicladores modernos com rampas de temperatura rápidas podem reduzir os tempos de amplificação PCR para menos de 30 minutos, em particular para amplicons curtos usando ciclos de temperatura dupla no lugar dos protocolos convencionais de três temperaturas. Da mesma forma, as demandas de preparação da amostra (incluindo lise e extração de DNA ou RNA, se necessário) devem ser consideradas como parte do tempo e da complexidade inerentes à técnica. Esses requisitos variam de acordo com a técnica, além do objetivo específico e do tipo de amostra.

Imagem 249A | Uma representação esquemática do mecanismo molecular envolvido na triagem de células recombinantes | Dylan2106 / Public domain | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Blue_white_assay_Ecoli.jpg) from Wikimedia Commons

Autor : Milos Pawlowski

Referências:

Técnicas usuais de biologia molecular II

Ferramentas de Biologia Molecular V