Reduzindo CRISPR-Cas9 cortes fora do alvo

AcrIIA4 é uma das proteínas responsáveis ​​pela inibição do sistema CRISPR-Cas9, mecanismo utilizado na edição de células de mamíferos. A adição de AcrIIA4 em células humanas evita a interação do Cas9 com o sistema CRISPR, reduzindo sua habilidade para cortar DNA. No entanto, diversos estudos chegaram à conclusão de que adicioná-lo em pequenas proporções após a edição do genoma reduz o número de cortes fora do alvo nos locais de concreto em que o Cas9 interage, o que torna todo o sistema muito mais preciso.

Evitando consequências ecológicas

Um dos principais objetivos do uso da tecnologia CRISPR-Cas9 é erradicar doenças, algumas das quais são encontradas em vetores de doenças, por exemplo, mosquitos. Anti-CRISPR As proteínas Anti-CRISPR podem impedir a movimentação genética, o que pode criar consequências incertas e catastróficas nos ecossistemas.

Detectar a presença de Cas9 em uma amostra

No regulamento para saber se uma determinada bactéria sintetiza Cas9, e usa conclusivamente CRISPR-Cas9, ou para descobrir o uso acidental ou não permitido deste sistema, AcrIIC1 pode ser usado. Como a proteína mencionada se liga a Cas9, uma plataforma microfluídica centrífuga foi projetada para descobri-la e determinar sua atividade catalítica.

Imagem 198A | Diagrama mostrando o sistema CRISPR-Cas do tipo IF, além dos mecanismos de inibição de três anti-CRISPRs do tipo IF. O tipo IF CRISPR complex é feito de 60 crRNA nucleotídeos e nove proteínas Cas (o tipo de proteína é especificado pelos números 5,8,7,6). AcrF1 vai para Cas7f, impedindo o acesso do objetivo DNA ao guia crRNA. AcrF2 interage tanto com Cas8f quanto com Cas7f, dificultando o acesso da objetiva DNA ao bolso de ligação. Finalmente, o AcrF3 forma um homodímero, interagindo com Cas3, evitando seu contato com a Cascade complex. Com base na representação de uma revisão encontrada nas referências abaixo. | BQUB19-SEsteban / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Type_I-F_CRISPR-Cas_system_and_inhibition_mechanisms_of_three_type_I-F_anti-CRISPRs..png) from Wikimedia Commons

Imagem 198A | Diagrama mostrando o sistema CRISPR-Cas do tipo IF, além dos mecanismos de inibição de três anti-CRISPRs do tipo IF. O tipo IF CRISPR complex é feito de 60 crRNA nucleotídeos e nove proteínas Cas (o tipo de proteína é especificado pelos números 5,8,7,6). AcrF1 vai para Cas7f, impedindo o acesso do objetivo DNA ao guia crRNA. AcrF2 interage tanto com Cas8f quanto com Cas7f, dificultando o acesso da objetiva DNA ao bolso de ligação. Finalmente, o AcrF3 forma um homodímero, interagindo com Cas3, evitando seu contato com a Cascade complex. Com base na representação de uma revisão encontrada nas referências abaixo. | BQUB19-SEsteban / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Type_I-F_CRISPR-Cas_system_and_inhibition_mechanisms_of_three_type_I-F_anti-CRISPRs..png) from Wikimedia Commons

Autor : John Kaisermann

Referências:

Técnicas usuais de biologia molecular II

Ferramentas de Biologia Molecular IV

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