Detecção de dois canais vs. um canal

Duas cores microarrays ou dois canais microarrays são geralmente hibridizados com cDNA preparado a partir de duas amostras a serem comparadas (por exemplo, tecido doente versus tecido saudável) e que são marcadas com dois fluoróforos diferentes. Os corantes fluorescentes normalmente usados ​​para marcação de cDNA incluem Cy3, que tem um comprimento de onda de emissão de fluorescência de 570 nm (correspondendo à parte verde do espectro de luz), e Cy5 com um comprimento de onda de emissão de fluorescência de 670 nm (correspondendo à parte vermelha da luz espectro). As duas amostras de cDNA marcadas com Cy são misturadas e hibridizadas em um único microarray que é então varrido em um microarray scanner para visualizar a fluorescência dos dois fluoróforos após excitação com um feixe de laser de um comprimento de onda definido. As intensidades relativas de cada fluoróforo podem então ser usadas no exame com base na proporção para revelar genes regulados para cima e para baixo.

Imagem 146A | Dois chips Affymetrix. Uma correspondência é mostrada no canto inferior esquerdo para comparação de tamanho. | Nenhum autor legível por máquina fornecido. Schutz assumiu (com base em reivindicações de direitos autorais). / CC BY-SA (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Affymetrix-microarray.jpg) do Wikimedia Commons

Imagem 146A | Dois chips Affymetrix. Uma correspondência é mostrada no canto inferior esquerdo para comparação de tamanho. | Nenhum autor legível por máquina fornecido. Schutz assumiu (com base em reivindicações de direitos autorais). / CC BY-SA (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Affymetrix-microarray.jpg) do Wikimedia Commons

Autor : Milos Pawlowski

Referências:

Técnicas usuais de biologia molecular I

Ferramentas de Biologia Molecular II

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